OCT櫻花包埋劑（Optimal Cutting Temperature Compound，商品名中含“櫻花”源自日本櫻花公司，該品牌為冷凍切片包埋劑的品牌之一）是一種水溶性聚乙二醇和聚乙烯醇類混合物，專門用于冰凍切片時對組織樣本進行包埋支撐。在病理學、組織化學、免疫組織化學及分子生物學等研究領域，許多實驗需要在未經石蠟包埋和脫蠟處理的條件下對新鮮或固定后的組織進行快速切片，以保留抗原活性和酶活性。OCT包埋劑在低溫下冷凍凝固后將組織包裹其中，為切片機的刀片提供一個均勻、堅固的支撐介質，使薄切操作能夠順利開展，同時避免組織在切片過程中發生扭曲或破碎。
該包埋劑的主要成分包括聚乙二醇（PEG，形成支撐骨架）、聚乙烯醇（PVA，增加韌性）以及少量防腐劑。其外觀為半透明、有一定粘稠度的液體，冷凍后變為不透明的白色固體。與常規的石蠟包埋不同，OCT包埋劑不需要經過脫水、透明和浸蠟等高溫處理步驟，組織在包埋過程中基本保持在接近生理狀態的水合環境中，因而特別適用于酶組織化學、免疫熒光及原位雜交等對抗原/核酸保存要求較高的實驗。使用OCT包埋劑制備的冷凍塊在-20℃至-30℃溫度下達到合適的切割硬度，切片厚度可達2-10μm，可直接貼附于載玻片上進行后續染色或反應。以下從主要特點、使用方法和注意事項三個方面展開介紹。
一、主要特點
1.快速冷凍特性：OCT包埋劑在-20℃左右的冷凍切片機內迅速凝固，與組織之間形成良好的融合和支撐。冷凍速度較快可減少冰晶對組織細胞形態的損傷。
2.水溶性：包埋塊在切片后可用水或緩沖液輕易洗去，不影響后續染色或抗體孵育步驟。這一點與石蠟切片需要用二甲苯脫蠟形成明顯對比。
3.適宜的切割硬度：在冷凍切片機的工作溫度下（通常-18℃至-30℃），OCT包埋劑具有與組織相近的硬度，不脆不粘，能夠切出連續、平整的薄片。
4.折射率匹配：包埋劑凝固后的折光率與組織相近，在切片和觀察時界面反光較少，有利于顯微鏡下的形態觀察。
5.多種規格包裝：市售OCT包埋劑常見包裝規格為118mL、125mL及500mL塑料瓶，配有螺口蓋或壓嘴頭，方便取用。
二、使用方法
1.組織準備：取新鮮組織或經固定后的組織，修整成合適大小（一般面積不超過2cm×2cm，厚度不超過5mm）。組織表面應盡量平整，如有較多液體可用濾紙吸干，避免包埋時形成過多冰晶。對于免疫組化檢測，組織需先用4%多聚甲醛或10%福爾馬林固定，再轉入15%-30%蔗糖溶液中脫水過夜（防止凍融過程形成冰晶）。
2.包埋操作：將冷凍切片機預冷至工作溫度（通常-20℃）。將適量OCT包埋劑滴加于冷凍切片機的樣品托（chuck）上，形成薄薄一層。用鑷子將組織放置于包埋劑上，調整位置使目標切面平行于樣品托底面。在組織周圍及上方再滴加OCT包埋劑，覆蓋組織。將樣品托快速置于冷凍切片機冷凍臺上加速凝固，或用液氮速凍（較厚組織時，但需注意防止劇烈氣溶膠導致組織裂隙）。整個包埋過程宜在5-10分鐘內完成，避免長時間暴露導致組織脫水。
3.冷凍塊修整：包埋劑凝固后（約5-10分鐘），將樣品托安裝在切片機的夾持器上。用刀片或切片機粗修去除多余包埋劑，修整出一個平整的包埋面，使組織處于適當位置。
4.切片：將刀片溫度調節至與包埋塊相近（溫差不宜過大）。設置所需切片厚度（常規3-10μm），以均勻速度轉動切片機搖輪。切出的薄片應完整、無褶皺、無裂紋。用清潔的毛筆或鑷子將切片展平，貼附于載玻片上。貼片后可直接進行固定和染色，或短暫存放于-80℃冰箱備用。
5.長期保存：已包埋但未切片的組織塊可用鋁箔或保鮮膜包裹，置于密封盒中-80℃長期保存（避免水分升華）。已切好但未染色的切片可在-80℃或-20℃短期保存。
三、使用注意事項
1.避免反復凍融：已包埋的組織塊盡量避免取出后回溫再冷凍，反復凍融會破壞組織形態和抗原性。宜按實驗需求提前分割組織，分別包埋保存。
2.防凍傷操作：操作過程中應佩戴防凍手套，避免直接接觸已冷凍的樣品托和包埋塊。液氮速凍應在防護面罩和手套保護下進行。
3.組織方向標記：包埋前應在樣品托的對應位置或使用標記筆記錄組織切面方向（尤其是對于有極性要求的組織，如神經、肌肉等）。
4.防止氣泡產生：包埋劑滴加時應沿樣品托邊緣緩慢加入，避免混入氣泡。氣泡在切片時會造成裂孔或刀痕，影響切片連續性。
5.包埋劑與組織的結合：某些含水量極低的組織（如脂肪、骨組織）與OCT包埋劑的結合較差，切片時可能發生分離。可在包埋前對組織表面做適當濕潤處理。
6.清潔與維護：包埋劑附著在切片機部件上干結后難以清除。每次使用后應及時用濕布或酒精擦拭樣品托座、刀架和載物臺，保持設備清潔。
7.安全性說明：部分品牌OCT包埋劑含有極低濃度的防腐劑，對皮膚和粘膜可能有輕微刺激性，建議操作時佩戴手套。雖無急性毒性報告，但仍應避免大量接觸或誤食。
OCT櫻花包埋劑為冰凍切片技術提供了一種便捷、可靠的組織支撐介質，有效解決了新鮮或固定組織因質地柔軟而難以直接切片的難題。與石蠟包埋相比，OCT包埋省去了脫水、透明和浸蠟等步驟，縮短了制樣周期，同時也保留了組織中的脂溶性物質和抗原活性，使其成為免疫組織化學和酶組織化學實驗中較為常用的制樣方法。使用者應根據實驗目的選擇合適的包埋劑——對于常規病理形態觀察，OCT包埋劑是方便之選；對于高精度的原位雜交或單分子RNA檢測，可能需要專用低熒光背景包埋劑。規范的操作包括：組織充分脫水防冰晶、包埋劑覆蓋無氣泡、切片溫度與組織硬度匹配。實驗結束后及時清潔設備，可有效延長切片機的使用壽命。對于不熟悉冷凍切片的操作者，建議先用動物試驗組織（如大鼠肝臟）進行預練習，熟練后再處理珍貴的臨床或實驗樣本。
